Lehet, hogy egy fehérjét szeretne denaturálni egy tudományos projekthez, vagy esetleg olvasta a denaturált ételeket, és szeretné tudni, hogyan működik. A denaturáció az a folyamat, amelynek során egy fehérje elveszíti alakját és szerkezetét a külső erők hatásának, beleértve a hőt, a sugárzást, a savakat és az oldószereket. A szerves oldószerek általában denaturálják a fehérjéket. A fehérje denaturálásának pontos módja attól függ, hogy melyik fehérjével szeretne dolgozni, mivel mindegyikhez különböző denaturáló szerekre van szükség különböző szinteken. Bár a legtöbb fehérje denaturálható, ha tudja, mit kell megváltoztatnia a fehérje környezetében.
Lépések
1/2 módszer: Fehérje denaturálása
1. lépés. Használjon hőt
A hő a fehérjék denaturálásának egyik legegyszerűbb és leggyakoribb módja. Ha a szóban forgó fehérje jelen van az élelmiszerekben, az étel egyszerű elkészítése denaturálja a fehérjéket. Sok fehérje denaturálható 100 ° C (212 ° F) vagy azt meghaladó hőmérsékletnek kitéve. Ez lehetővé teszi a fehérjék alvadását és csökkenti oldhatóságukat.
Az expozíció hossza attól függ, hogy mit tesz ki hőnek. Egy tojás például öt perc alatt serpenyőben, közepes lángon megsülhet, míg a sült órákon át süthető
2. lépés Alkalmazzon alkoholt
Az alkohol megzavarja a peptidkötés amidcsoportjai közötti hidrogénkötéseket. Amikor egy fehérjét alkoholos oldatnak tesznek ki, az alkoholmolekulák új kötéseket hoznak létre a fehérje lánccal. 70% alkoholos oldattal törje át a baktériumok sejtfalát és denaturálja a fehérjét.
A tömény alkoholok veszélyesek lehetnek, mivel gyúlékonyak és mérgezőek. Mindig viseljen teljes védőfelszerelést, beleértve a kesztyűt és a szemvédőt, és kezelje biztonságos, szabályozott hőmérsékletű környezetben
3. lépés. Módosítsa a pH -t
A fehérje belső szerkezete felbomolhat, ha környezete nagyon savas vagy nagyon lúgos, mivel megzavarják a fehérje sóhidjait összetartó ionos kötéseket. Adjunk hozzá savat vagy bázist a fehérjéhez. A denaturáció ösztönzése érdekében a környező környezet pH -ja 10 felett vagy 4 alatt kell legyen. Ha savval indukálja a változást, a pH -nak 2 és 5 között kell lennie.
A pH megváltoztatása ionizálhat egy aminosavat, attól függően, hogy az adott aminosavban lévő egyes funkcionális csoportok pKa. Az aminosavban lévő amino- vagy karboxilcsoportot is ionizálhatja
4. lépés: Próbálja ki a nehézfémsókat
A nehézfémek megzavarhatják a fehérje kötéseit, így elveszíthetik szerkezetüket. A nehézfémek, például a higany és az ólom sói különböző fehérjék denaturálására használhatók. Az ilyen sók a legtöbb vegyipari beszállítótól beszerezhetők, és ezeket mindig óvatosan és megfelelő biztonsági felszereléssel kell használni, beleértve a kesztyűt és a szemvédőt.
A nehézfémek kölcsönhatásba léphetnek egy fehérje funkcionális oldallánc -csoportjaival, komplexeket képezve. A nehézfémek a fehérje aminosav oldalláncait is oxidálják
2/2 módszer: Fehérjék renurálása
1. lépés Határozza meg, hogy egy fehérje képes -e újra hajtogatni
A denaturáció egyes formái állandóak, míg mások visszavonhatók. Például egy tojás vagy hús főzését nem lehet visszavonni, de a magas pH -értéknek kitett fehérje semleges környezetbe kerülve visszanyerheti alakját.
Az, hogy a fehérje képes -e újra feltekeredni, a DNS -től függ. A DNS tárolja azokat az információkat, amelyek szükségesek ahhoz, hogy a fehérje visszatérjen eredeti állapotába
2. lépés Távolítsa el a denaturáló tényezőt
Állítsa vissza a fehérje körüli környezetet, és állítsa le a denaturáló elemet. Távolítsa el például a savat vagy a bázist, vagy hozza vissza a fehérjét ésszerűbb hőmérsékletre.
3. lépés. Használjon renaturációs készletet
Sok laboratóriumi kellékeket forgalmazó vállalat értékesít renaturációs készleteket, amelyek lehetővé teszik a legjobb paraméterek szűrését a renaturáció ösztönzése érdekében. Az ilyen készletek különösen hasznosak lehetnek, ha a fehérjéket laboratóriumi vagy kísérleti körülmények között nézi.
Tippek
- A denaturált fehérje elveszíti negyedéves, harmadlagos és másodlagos szerkezetét, amely természetes állapotban látható, de elsődleges szerkezete megmarad.
- A denaturált fehérje is elveszíti bioaktivitásának egy részét, bizonyos esetekben, mint az enzimek, elveszíti működőképességét. Például a szubsztrátok már nem tudnak kötődni a denaturált enzimekhez.
- A denaturált fehérje elveszítheti oldhatóságát az oldatban.
- A nukleinsavakat denaturálhatja laboratóriumi technikákkal a szálak elválasztására.
